style="width:4.99329in;height:1.29338in" /> (1) 本文是学习GB-T 6432-2018 饲料中粗蛋白的测定 凯氏定氮法. 而整理的学习笔记,分享出来希望更多人受益,如果存在侵权请及时联系我们
本标准规定了测定饲料中粗蛋白质的凯氏定氮法。
本标准适用于饲料原料、配合饲料、浓缩饲料、精料补充料和添加剂预混合饲料中粗蛋白质的测定。
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GB/T 601 化学试剂 标准滴定溶液的制备
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 14699.1 饲料 采样
GB/T 20195 动物饲料 试样的制备
试样在催化剂作用下，经硫酸消解，含氮化合物转化成硫酸铵，加碱蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，
再用盐酸标准滴定溶液滴定，测出氮含量，乘以6.25,计算出粗蛋白质含量。
除非另有说明，仅使用分析纯试剂。
4.1 水：GB/T 6682,三级。
4.7 混合催化剂：称取0.4 g 五水硫酸铜、6.0 g
硫酸钾或硫酸钠，研磨混匀；或购买商品化的凯氏定氮 催化剂片。
4.8 硼酸吸收液I: 称取20 g 硼酸，用水溶解并稀释至1000 mL。
4.9 硼酸吸收液Ⅱ:1%硼酸水溶液1000 mL, 加入0.1%溴甲酚绿乙醇溶液10 mL,0.1%
甲基红乙醇 溶液7 mL,4% 氢氧化钠水溶液0.5 mL,
混匀，室温保存期为1个月(全自动程序用)。
4.10 氢氧化钠溶液：称取40 g
氢氧化钠，用水溶解，待冷却至室温后，用水稀释至100 mL。
4.11 盐酸标准滴定溶液：c(HCl)= 0.1 mol/L 或0.02 mol/L, 按 GB/T 601
配制和标定。
4.12 甲基红乙醇溶液：称取0.1 g 甲基红，用乙醇溶解并稀释至100 mL。
4.13 溴甲酚绿乙醇溶液：称取0.5 g 溴甲酚绿，用乙醇溶解并稀释至100 mL。
4.14
混合指示剂溶液：将甲基红乙醇溶液和溴甲酚绿乙醇溶液等体积混合。该溶液室温避光保存，有
GB/T 6432—2018
效期3个月。
5.1 分析天平：感量0.0001 g。
5.5 凯氏蒸馏装置：常量直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式。
5.6 定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动、全自动定氮仪。
按照 GB/T 14699.1 抽取有代表性的饲料样品，用四分法缩减取样。按照 GB/T
20195 制备试样，
粉碎，全部通过0.42 mm 试验筛，混匀，装入密闭容器中备用。
7.1.1.1 凯氏烧瓶消煮
平行做两份试验。称取试样0.5g～2g (含氮量5 mg～80 mg,准确至0.0001 g),
置于凯氏烧瓶
中，加入6.4 g 混合催化剂，混匀，加入12 mL
硫酸和2粒玻璃珠，将凯氏烧瓶置于电炉上，开始于约
200℃加热，待试样焦化、泡沫消失后，再提高温度至约400℃,直至呈透明的蓝绿色，然后继续加热至
少 2 h。 取出，冷却至室温。
7.1.1.2 消煮管消煮
平行做两份试验。称取试样0.5 g～2 g(含氮量5 mg～80 mg,准确至0.0001 g),
放入消煮管中，
加入2片凯氏定氮催化剂片或6.4 g 混合催化剂，12 mL
硫酸，于420℃消煮炉上消化1 h。 取出，冷却
至室温。
待试样消煮液冷却，加入20 mL 水，转入100 mL
容量瓶中，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，作为试
样分解液。将半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有20 mL 硼酸吸收液 I(4.8)
和 2 滴混合指示剂
(4.14)的锥形瓶中。蒸汽发生器的水中应加入甲基红指示剂(4.12)数滴，硫酸数滴，在蒸馏过程中保持
此液为橙红色，否则需补加硫酸。准确移取试样分解液10 mL～20mL
注入蒸馏装置的反应室中，用
少量水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加10 mL
氢氧化钠溶液(4.10),小心提起玻璃塞使之流入反
应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水密封，防止漏气。蒸馏4 min
降下锥形瓶使冷凝管末端离开吸收 液面，再蒸馏1 min, 至流出液 pH
值为中性。用水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内，然后停止
蒸馏。
GB/T 6432—2018
将7.1.2蒸馏后的吸收液立即用0.1 mol/L 或0.02 mol/L
盐酸标准滴定溶液(4.11)滴定，溶液由
蓝绿色变成灰红色为滴定终点。
按7.1.1步骤进行。
7.2.2.1 待试样消煮液冷却，加入60 mL～100mL
蒸馏水，摇匀，冷却。将蒸馏装置的冷凝管末端浸入 装有25 mL 硼酸吸收液
I(4.8) 和2滴混合指示剂(4. 14)的锥形瓶中。然后小心地向凯氏烧瓶中加入
50 mL 氢氧化钠溶液(4.10),摇匀后加热蒸馏，直至馏出液体积约为100 mL 。
降下锥形瓶，使冷凝管末 端离开液面，继续蒸馏1 min～2min, 至流出液 pH
值为中性。用水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥 形瓶内，然后停止蒸馏。
7.2.2.2
采用半自动凯氏定氮仪时，将带消煮液的消煮管插在蒸馏装置上，以25 mL
硼酸吸收液 I
(4.8)为吸收液，加入2滴混合指示剂(4.14),蒸馏装置的冷凝管末端要浸入装有吸收液的锥形瓶内，然
后向消煮管中加入50 mL 氢氧化钠溶液(4.10)进行蒸馏，至流出液 pH
值为中性。蒸馏时间以吸收液 体积达到约100 mL
时为宜。降下锥形瓶，用水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内。
7.2.2.3
采用全自动凯氏定氮仪时，按仪器操作说明书进行测定。
用0.1 mol/L
盐酸标准滴定溶液(4.11)滴定吸收液，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。
精确称取0.2 g 硫酸铵(精确至0.0001g),
代替试样，按7.1或7.2步骤进行操作，测得硫酸铵含氮
量应为(21.19±0.2)%,否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确。
精确称取0.5 g 蔗糖(精确至0.0001g),
代替试样，按7.1或7.2进行空白测定，消耗0.1 mol/L 盐
酸标准滴定溶液的体积不得超过0.2 mL, 消耗0.02 mol/L
盐酸标准滴定溶液体积不得超过0.3 mL。
试样中粗蛋白质含量以质量分数w
计，数值以质量分数(%)表示，按公式(1)计算：
style="width:4.99329in;height:1.29338in" /> (1)
式中：
V² 滴定试样所消耗盐酸标准滴定溶液的体积，单位为毫升(mL);
V, 滴定空白所消耗盐酸标准滴定溶液的体积，单位为毫升(mL);
c — 盐酸标准滴定溶液的浓度，单位为摩尔每升(mol/L);
GB/T 6432—2018
m ——试样质量，单位为克(g);
V — 试样消煮液总体积，单位为毫升(mL);
V'— 蒸馏用消煮液体积，单位为毫升(mL);
14 ——氮的摩尔质量，单位为克每摩尔(g/mol);
每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为测定结果，计算结果表示至小数点后两位。
在重复性条件下，两次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值与该平均值的比值应符合以下
要求：
粗蛋白质含量大于25%时，不超过1%;
粗蛋白质含量在10%～ 25%时，不超过2%;
粗蛋白质含量小于10%时，不超过3%。
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